مناسبی در پیش رو قرار داد.آنزیم  فسفو فروکتوکیناز -1 از آنزیمهای سیتوزولی در مسیر گلیکولیز می باشد که نقش کلیدی در روند تنظیم گلیکولیز دارد.عوارض ناشی از نقص موروثی آنزیم pfk-1 در عضلات اسکلتی بصورت خستگی و کاهش توان حرکات عضلانی می باشد. در مواردی هم نقص آن باعث رشدسریع سلولهای سرطانی می شود. درتحقیق حاضر به  تاثیر عصاره هیدر الکلی برگ گیاه جغجغه (با توجه به دارا بودن اثرات ضدالتهابی، ضد میکروبی و ضد دیابتی ) بر بیان ژن pfk-1در موشهای دیابتی نوع 1می پردازیم.

در این مطالعه 45 سر موش صحرایی نر به طور تصادفی در سه گروه شاهد سالم، شاهد دیابتی و دیابتی تحت تیمار تجویز عصاره جغجغه تقسیم شدند. با تزریق استرپتوزوتوسین (mg/kg 60) در موش­های صحرایی نر (300-150 گرم) دیابت نوع 1 ایجاد شد.گروه دیابتی تحت تیمار به صورت روزانه (mg/kg 300) عصاره برگ گیاه جغجغه را به صورت گاواژ به مدت 30 روز دریافت نمودند. گروه شاهد سالم و شاهد دیابتی آب مقطر دریافت کردند. سپس در روز قبل از تجویز عصاره و روزهای 15 و 30 بعد از تجویز عصاره میزان گلوکز خون اندازه­گیری شد و بیان ژن PFK-1 بافت کبدی توسط روش Real-Time PCR بررسی گردید. نتایج نشان داد گلوکز خون در روز 15کاهش می یابد اما بین گروه شاهد دیابتی و دیابتی تحت تیمار تفاوت معنی داری مشاهده نشد میزان بیان ژن PFK در گروه دیابتی تحت تیمار در روز 15 تفاوت معنی داری نسبت به شاهد دیابتی ندارد در بین گروهها تفاوت معنی داری برای بیان ژنPFK  وجود ندارد. بنابراین تجویز عصاره هیدروالکی گیاه جغجغه بر بیان ژن فسفوفروکتوکیناز -1 در بیماران دیابتی نوع 1 بی تاثیر می باشد.

کلمات کلیدی: جغجغه، ژن فسفوفروکتو کیناز-1، دیابت نوع1

فصل اول: مقدمه وکلیات

1-1- مقدمه-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد– 2

2-1-کلیات تحقیق————- 3

1-2-1-دیابت-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد 3

2-2-1- انواع دیابت———— 3

3-2-1- علائم بروز دیابت——- 4

4-2-1- درمان دیابت :———- 5

3-1- گیاه جغجغه ((Prosopis farcta————– 8

1-3-1- خواص دارویی جغجغه— 8

4-1- فسفوفروکتوکیناز 1(PFK-1):—————- 9

5-1- ضرورت و اهداف تحقیق :- 13

فصل دوم: مروری بر منابع

1-2- اثرات ضد دیابتی گیاهان– 16

1-1-2- انار-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد 17

2-1-2-مكانیسم اثر انار در دیابت:————— 17

2-1-2- سیر—————- 19

2-2- اثر گیاه برفعالیت وبیان ژن—————- 21

فصل سوم: مواد و روشها

1-3- موادو روشها———— 25

2-3- تهیه عصاره هیدروالکلی برگ گیاه جغجغه—- 27

3-3- حیوانات آزمایشگاهی—– 28

1-3-3- نحوه گروهبندی:—— 28

2-3-3- روش القای دیابت تجربی:————— 29

3-3-3- اندازه گیری قند و وزن موشها:———– 29

4-3-3- مراحل انجام تشریح:— 29

4-3- بررسی بیان ژن———- 31

1-4-3- مشخصات توالی ژن PFK-1————- 31

2-4-3- طراحی پرایمرها—— 35

3-4-3- آماده سازی پرایمر—– 35

5-3- استخراج RNA:——— 36

1-5-3- استخراج RNA از نمونه های تازه کبد توسط کیت Geneall Hybrid Rtm—— 36

1-5-3- بررسی کمیت و کیفیت RNA  استخراج شدهبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————- 38

6-3- سنتز cDNA———– 39

1-6-3- سنتز cDNA توسط کیتThermo SCIENTIFICبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد——— 39

7-3- واکنش های PCR——- 41

1-7-3 – PCR شیب دمایی—- 41

2-7-3- PCR معمولی——– 43

8-3- الکترفورز————— 45

1-8-3 – مواد مورد نیازجهت تهیه ژل الکتروفورز—- 45

1-1-8-3- آگارز————- 45

2-1-8-3- اتیدیوم بروماید—– 46

3-1-8-3- لودینگ بافر——– 46

4-1-8-3-طرز تهیه محلول Tris-Hcl———— 46

4-1-8-3- شناساگرهای اندازهDNA————- 47

9-3- روش کار با ژل الکترفورز– 47

10-3- رسم منحنی استاندارد:– 48

10-3- واکنش Real-Time PCR—————- 48

11-3- Threshold و مقدار CT:- 50

12-3- تعیین توالی محصولات  (Direct Sequencing) PCRبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد——– 51

10-2-3- آنالیز بیان ژن——- 52

13-3- تجزیه وتحلیل داده ها— 52

فصل چهارم: نتایج و بحث

1-4- جمع آوری نمونه :——- 54

2-4- بررسی نتایج وزن موشهای مورد مطالعه—— 54

3-4- بررسی نتایج گلوکز ناشتای سرم موشهای مورد مطالعهبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد——— 56

5-4- نتایج استخراج RNA:—- 57

6-4- نتایج حاصل ازساخت cDNA بر روی ژل آگاروزبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————– 59

7-4-  نتایج تعیین غلظت و کیفیت RNA توسط اسپکتروفتومتریبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد— 61

1-7-4-  نتایج مربوط به PCR شیب دمایی——- 61

8-4- نتایج منحنی استاندارد—- 62

1-8-4- منحنی استاندارد ژن TBP————– 63

2-8-4-منحنی استاندارد ژن PFK-1————- 63

9-4- نتایج واكنش  Real Time PCR———— 64

1-9-4- تکثیر ژنPFK——– 65

2-9-4-تکثیر ژن TBP——– 66

10-4- ارزیابی  کارایی تکثیر ژنهای مور مطالعه از طریق آنالیز منحنی ذوب:———— 66

1-10-4- منحنی تغییرات ذوب بر حسب دمای ژن  PFKبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد———- 67

2-10-4-منحنی تغییرات ذوب بر حسب دمای ژن TBPبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد———— 67

11-4-  آنالیز منحنی ذوب ژن PFK————- 68

12-4-آنالیز منحنی ذوب ژن TBP————— 68

13-4- نتایج حاصل از Real timePCR ژن PFK 1 بر روی ژل آگارزبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد– 70

14-4- نتایج بررسی بیان ژن PK—————- 70

15-4- بحث:—————- 71

16-4- پیشنهادات———— 73

منابع:-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد—— 75